Clonamiento molecular de las asas intracelulares de los receptores muscarínicos m2 y m3 implicadas en la interacción con proteínas g en el músculo liso traqueal de bovino / Molecular cloning of the intracullular ases of the receptors muscarinic m² y mü implecated in the interation with proteins in the muscle smooth tracheal of bovine

En el músculo traqueal de bovino (MLTB) se ha propuesto una vía de señalización celular asociada con la actividad de una guanililciclasa de membrana plasmática (GCm) la cual se encuentra regulada por dos subtipos de receptores muscarínicos (mAChRs) m2 y m3 acoplados a proteínas G de manera opuesta. El objetivo del presemte estudio fue la identificación de las secuencias primarias de las regiones intracelulares de los receptores muscarínicos implicadas en la interacción con las proteínas G que regulan a esta GCm. El cDNA del MLTB fue usado para la amplificación de las regiones intracelulares de los subtipos m2 y m3 utilizando oligonucleótidos cebadores específicos. Los productos de amplificación fueron identificados en geles de agarosa y posteriormente secuenciados, encontrándose un 99 por ciento de similitud con las secuencias obtenidas del bGen Data Bank de los mACHRs en cerebro de bovino. Este es el primer clonamiento molecular para los mACHRs presentes en MLTB y sugiere posibles similitudes con el cerebro de bovino en relación a la interacción receptor/proteína G

G-protein-dependent antagonists binding in M3 mAchR from tracheal smooth muscle

Los subtipos M3 y M2 del mAchR fueron localizados en fracciones de membranas plasmáticas de músculos liso traqueal de bovino (MLTB). Los mAchRs nativos de MLTB fueron estudiados usando enlazamientos de [3H]QNB. La hetereogeneidad del receptor fue expresada para agonista y antagonista muscarínicos siendo los estados de alta afinidad sensibles a GTPyS. Mostramos que los efectos de GTPgS parecen ser mediados por proteínas Gi/o sensibles a PTX. Se detectó la hetereogeneidad del mAchR hacia 4-DAMP (M3) y pirenzepina (M1). Sin embargo, los antagonistas subtipo M2 como methoctramina y AF-DX 116 no mostraron tales respuestas en la presencia o ausencia de GTPyS. A través de la alquilación con 4-DAMP del subtipo M3 del mAchR, prevaleció el subtipo M2 el cual exhibió un enlazamiento dependiente de GTPyS parecido a un agonista mientras el enlazamiento de los antagonistas fue insensibles al GTPgS. Por lo anterior, la heterogeneidad a antagonistas del receptor descrita aquí es debida al subtipo M3 del mAchR, el cual muestra dos estados de afinidad siendo uno regulado por proteínas Gi/o